期刊简介
本刊是中国科学技术协会主管、中国病理生理学会主办、暨南大学承办的国家级综合性病理生理学高级学术刊物。杂志刊登有关病理生理学理论研究（包括实验研究和临床研究）方面的论著、专题综述、教学研究、科研仪器和药品评价介绍等，注重介绍疾病发病机制和临床病理生理学研究。适合医药院校教学科研人员、研究生、临床医务工作者和高年级医学生阅读。
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首页>中国病理生理杂志
- 杂志名称：中国病理生理杂志
- 主管单位：中国科学技术协会
- 主办单位：中国病理生理学会
- 国际刊号：1000-4718
- 国内刊号：44-1187/R
- 出版周期：月刊
期刊荣誉：2008和2011年分别被评为第一届和第二届中国精品科技期刊；2008～2011年连续4次荣获“百种中国杰出学术期刊”奖；2011年被评为RCCSE（武汉大学中国科学评价研究中心）中国权威期刊；2010年荣获广东省期刊评选最高奖——品牌期刊奖；2011年荣获广东省优秀科技期刊一等奖。期刊收录：万方收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏, 维普收录(中), 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 知网收录(中), CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), 国家图书馆馆藏
几种线粒体DNA提取方法的比较
李伟文；陆松敏；刘建仓；武凡；李萍；柏干荣；王正国
关键词：线粒体疾病, 盐沉淀法, 分离提取, 碱变性法, 人血白细胞, 蛋白质降解, 亚基基因, 方法, 操作时间, 紫外分光光度法, 十二烷基硫酸钠, 琼脂糖凝胶电泳, 产量, 程序化死亡, 自然状态, 抑制细胞, 遗传机理, 细胞凋亡, 上皮细胞, 酶的活性
摘要：目的:将提取线粒体DNA的碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法加以比较,以得到方便快速提取线粒体DNA的方法.方法:采用健康成年雄性Wistar大鼠,取回肠上皮细胞样本18 份,每份含3×10?6细胞,每6份分别用碱变性法、Triton法、改进高盐沉淀法提取线粒体DNA ,紫外分光光度法定量.再用琼脂糖凝胶电泳和线粒体ATPase 6亚基基因PCR扩增产物鉴定所提取的线粒体DNA.结果:3种方法提取线粒体DNA量差别明显:改进高盐沉淀法量多,为(1.26±0.23) μg;碱变性法次之,为(0.52±0.18) μg;Triton法为 (0.31±0.16) μg.A260/A280均大于1.7.说明改进高盐沉淀法提取线粒体D NA具有操作简单,产量多的优点.将改进高盐沉淀法提取线粒体DNA用于PCR扩增,测定出了线粒体DNA ATPase 8亚基基因序列,说明该法所提取mtDNA可用于mtDNA测序.讨论和结论: 线粒体在细胞凋亡,衰老及程序化死亡中发挥重要作用.已在多种疾病中发现mtDNA突变.对线粒体疾病的分子遗传机理的研究可以进一步阐明这些疾病的病因,并为治疗提供理论指导.胡义德、Tamura和Palva等用碱变性法提取了人血白细胞、心肌等组织中mtDNA;戴纪刚等建立的Triton法先除去细胞核,再分离提取胞浆中mtDNA.而高盐沉淀法通过SDS(十二烷基硫酸钠)破坏细胞膜、核膜,使蛋白质变性,从而游离出核酸,EDTA抑制细胞中DNA酶的活性, 蛋白酶K进一步将蛋白质降解成小肽,加入饱和乙酸钠后,绝大部分线性大分子量DNA和蛋白质在SDS作用下变性形成沉淀,环状mtDNA仍为自然状态,通过高速离心,即可得到mtDNA.3种方法各有优缺点:碱变性法操作时间较短,要求条件比较严格,不易重复; Triton法通过核质分离提取mtDNA操作时间短,但产量低,易降解.而高盐沉淀法操作简单,易重复 ,产量多,可依需用量扩大反应体系,使mtDNA质量得以容易控制.
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